Zaujíma vás, aké množstvo kofeínu sa nachádza vo vašej šálke kávy?

Inštrumentálne chomatografické metódy sú veľmi účinné a pre analytické merania vhodné. Umožňujú nám jednotlivé zložky zmesi nielen separovať, ale aj ich identifikovať a stanoviť presné množstvo nachádzajúce sa vo vzorke.

1. každý extrakt kávy bol rozpustený v etanole o c 1mg/ml
2. Z každej vzorky bolo automatickým vzorkovačom odobrané 0,2µl a nanesené na kolónu
3. Použitý bol héliový nosný plyn, nástrek vzorky pri t= 280 °C
4. Výsledkom boli chromatogramy, na ktorých sme identifikovali plochu píku, ktorý zodpovedal kofeínu. Vo výslednom chromatograme bol pík integrovaný a bola zistená jeho plocha, ktorá bola zaznamenaný

HPLC

HPLC (high performance liqiud chromatography) je kolónová kvapalinová chromatografia, pri ktorej mobilnú fázu tvorí kvapalina astacionárnu pevná látka. Systém HPLC pozostávazpumpy, dávkovacieho ventilu, kolóny adetektora, ktoré sú navzájom prepojené v uvedenom poradí.
Pumpa zabezpečuje, s využitím vysokého tlaku, plynulý prietok obilnej fázy cez celý systém,a to určitou voliteľnou rýchlosťou (ml/min).
Keďže mobilná fáza preteká cez sorbent v kolóne, práve tu dochádza k samotnej chromatografickej separácii látok obsiahnutých v analyzovanej zmesi.
Navzájom oddelené zložky zmesi unášané mobilnou fázou vystupujú z kolóny a prechádzajú do detektora, ktorý ich na základe ich rozličných fyzikálnych vlastností identifikuje.

Chromatografická analýza prebehla na kolóne C18 s nepolárnym porvchom, najrýchlejšie ňou bude teda pretekať analyt rozpustený v polárnom rozpúšťadle. Zásobník mobilnej fázy bol v zložení: metanol a 0,1% H₃PO₄
Po chromatografickom meraní roztoku štandardu kofeínu bola zostrojená kalibračná krivka ako závislosť plochy píku a koncentrácie kofeínu vo vzorke
Nasledovala analýza našich extraktov kofeínu, výsledkom boli chromatogramy, na ktorých sme kofeín dokázali kvalitatívne identifikovať porovnaním retenčných časoch štandardu kofeínu a sledovaného analytu